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磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2位脂酰基水解酶，广泛存在于动植物组织、细菌、细胞核分泌物中，参与脂肪消化，精子成熟、细胞信号传递、脂质过氧化修复、宿主反应等生理过程，在控制体内磷脂类物质平衡、调节机体新陈代谢、参与疾病的病理进程等方面发挥着及其重要的作用。

磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸胆碱（HEPC）产生游离巯基，与DTNB反应生成黄色物质，在412nm处有特征吸收峰。

• 组织样本：按照质量(g)∶提取液体积(mL)＝1∶5～10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。
  
• 细胞样本：按照细胞数量(10⁴个)∶提取液体积(mL)＝500～1000∶1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。
  
• 血清样本：直接测定。

• 按下表加入各成分配制反应体系：
  

  成分(μL)	对照管	测定管
  样品	100	100
  试剂二	900
  试剂三		900

• 充分混匀，37℃反应10min
  
• 于1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定412nm处吸光值，记为A_对照管和A_测定管，△A＝A_测定管－A_对照管

• 按照蛋白浓度计算
  酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
  PLA2活性(nmol/min/mg prot)＝△A÷(ε×d)×V_反总÷(V_样×Cpr)÷T＝73.53×△A÷Cpr
  
• 按照样本质量计算
  酶活性定义：每克组织每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
  PLA2活性(nmol/min/g鲜重)＝△A÷(ε×d)×V_反总÷(W×V_样÷V_样总)÷T＝73.53×△A÷W
  
• 细胞数量计算
  酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
  PLA2活性(nmol/min/10⁴ cell)＝△A÷(ε×d)×V_反总÷(V_样×细胞数量÷V_样总)÷T＝73.53×△A÷细胞数量
  4 按照液体体积计算
  酶活性定义：每毫升血清每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
  PLA2活性(nmol/min/mL)＝△A÷(ε×d)×V_反总÷V_样÷T＝73.53×△A

• ε：TNB消光系数，13600L/mol/cm；
  
• d：比色皿光径，1cm；
  
• V_反总：反应总体积，1mL；
  
• V_样：反应体系中加入样本体积，0.1mL；
  
• W：样本质量，g；
  
• V_样总：加入提取液体积，1mL；
  
• T：反应时间，10min。